內(nèi)標法（色譜分析中的定量方法）

概念與原理

（f）：

f= (As/ms)/(Ar/mr)

其中As和Ar分別為內(nèi)標物和對照品的峰面積或峰高，ms和mr分別為加入內(nèi)標物和對照品的量。

再取各品種項下含有內(nèi)標物的待測組分溶液進樣，記錄色譜圖，再根據(jù)含內(nèi)標物的待測組分溶液色譜峰響應(yīng)值，計算含量（mi）：

mi=f×Ai/(As/ms)

其中 Ai和As分別為供試品和內(nèi)標物的峰面積或峰高，ms為加入內(nèi)標物的量。必要時，再根據(jù)稀釋倍數(shù)、取樣量和標示量折算成為標示量的百分含量，或根據(jù)稀釋倍數(shù)和取樣量折算成百分含量。

內(nèi)標物

定義

將一個已知質(zhì)量的純物質(zhì)，加入至待測樣品溶液中，以此純物質(zhì)的量為標準，對比測定待測組分的含量，該純物質(zhì)稱為內(nèi)標物。

選擇要求

a．原樣品中不含組分

b．與待測物保留時間應(yīng)接近,但不重疊

c．為高純度標準物質(zhì)，或含量已知物質(zhì)

d.在給定色譜條件下具有一定化學穩(wěn)定性。

影響因素

影響內(nèi)標和被測組分峰高或峰面積比值的因素主要有化學方面的、色譜方面的和儀器方面的三類。

由化學方面的原因產(chǎn)生的面積比的變化常常在分析重復(fù)樣品時出現(xiàn)。

化學方面的因素包括：

1、內(nèi)標物在樣品里混合不好；

2、內(nèi)標物和樣品組分之間發(fā)生反應(yīng)，

3、內(nèi)標物純度可變等。

對于一個比較成熟的方法來說，色譜方面的問題發(fā)生的可能性更大一些，色譜上常見的一些問題對絕對面積的影響比較大，對面積比的影響則要小一些，但如果絕對面積的變化已大到足以使面積比發(fā)生顯著變化的程度，那么一定有某個重要的色譜問題存在，比如進樣量改變太大，樣品組分濃度和內(nèi)標濃度之間有很大的差別，檢測器非線性等。進樣量應(yīng)足夠小并保持不變，這樣才不致于造成檢測器和積分裝置飽和。如果認為方法比較可靠,而色譜柱看來也是正常的話，應(yīng)著重檢查積分裝置和設(shè)置、斜率和峰寬定位。對積分裝置發(fā)生懷疑的最有力的證據(jù)是：面積比可變，而峰高比保持相對恒定。

特點

優(yōu)點

1.測定的結(jié)果較為準確，由于是通過測量內(nèi)標物及被測組分的峰面積的相對值來進行計算的，因而在一定程度上消除了操作條件等的變化所引起的誤差。

2. 操作過程中樣品和內(nèi)標是混合在一起注入色譜柱，因此只要混合溶液中被測組分與內(nèi)標的量的比值恒定，上樣體積的變化不會影響影響定量結(jié)果。

3.內(nèi)標法抵消了上樣體積，乃至流動相、檢測器的影響。

缺點

1.操作程序較為麻煩。

2.有時尋找合適的內(nèi)標物也有困難。

注意事項

當配制校正因子測定用的對照溶液和含有內(nèi)標物質(zhì)的待測組分溶液使用同一份內(nèi)標物質(zhì)溶液時，則配制內(nèi)標物質(zhì)溶液不必精密稱（量）取。

采用內(nèi)標法定量時，內(nèi)標物的選擇是一項十分重要的工作。理想地說，內(nèi)標物應(yīng)當是一個能得到純樣的已知化合物，這樣它能以準確、已知的量加到樣品中去，它應(yīng)當和被分析的樣品組分有基本相同或盡可能一致的物理化學性質(zhì)(如化學結(jié)構(gòu)、極性、揮發(fā)度及在溶劑中的溶解度等)、色譜行為和響應(yīng)特征，最好是被分析物質(zhì)的一個同系物。當然，在色譜分析條件下，內(nèi)標物必須能與樣品中各組分充分分離。需要指出的是，在少數(shù)情況下，分析人員可能比較關(guān)心化合物在一個復(fù)雜過程中所得到的回收率，此時，他可以使用一種在這種過程中很容易被完全回收的化合物作內(nèi)標，來測定感興趣化合物的百分回收率，而不必遵循以上所說的選擇原則。