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免疫組化檢查（抗體抗原具有高度特異性結(jié)合原理）

次瀏覽 | 更新時(shí)間：2023-05-19

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免疫組化檢查

抗體抗原具有高度特異性結(jié)合原理

免疫組化檢查（immunohistochemistry examination）指應(yīng)用免疫學(xué)抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑（熒光素、酶、金屬離子、同位素）顯色，確定組織或細(xì)胞內(nèi)抗原（多肽和蛋白質(zhì)），對(duì)其進(jìn)行定位、定性及相對(duì)的定量檢查。

基本信息

中文名	免疫組化檢查
外文名	immunohistochemistry examination
原理	抗體抗原具有高度特異性結(jié)合原理

原理

免疫組織化學(xué)利用抗體和抗原具有高度特異性結(jié)合的原理。先將組織或細(xì)胞中的某種化學(xué)物質(zhì)提取出來，以此作為抗原或半抗原，通過免疫動(dòng)物后獲得特異性抗體，再以此抗體探測組織或細(xì)胞中的同類抗原。由于抗原與抗體的復(fù)合物是無色的，因此必須借助組織化學(xué)的方法將抗原抗體結(jié)合的部位顯現(xiàn)，以達(dá)到對(duì)未知抗原進(jìn)行定性、定位或定量。

分類

1.按標(biāo)記物質(zhì)的種類分類，如熒光染料、放射性同位素、酶（主要有辣根過氧化物酶和堿性磷酸酶）、鐵蛋白、膠體金等，可分為免疫熒光法、放射免疫法、免疫酶標(biāo)法和免疫金銀法等。
2.按染色步驟分類，可分為直接法（又稱一步法）和間接法（二步、三步或多步法）。與直接法相比，間接法的靈敏度提高了許多。
3.按結(jié)合方式分類，可分為：①抗原-抗體結(jié)合，如過氧化物酶-抗過氧化物酶（PAP）法；②親和連接，如卵白素-生物素-過氧化物酶復(fù)合物（ABC）法、鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結(jié)（SP）法等。其中SP法是比較常用的方法；③聚合物鏈接，如即用型二步法，此方法尤其適合于內(nèi)源性生物素含量高的組織抗原檢測。

常用方法

1.免疫熒光法
是最早建立的免疫組織化學(xué)技術(shù)。先將已知抗體標(biāo)上熒光素，以此作為探針檢查細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原，在熒光顯微鏡下觀察。當(dāng)抗原抗體復(fù)合物中的熒光素受激發(fā)光的照射后即會(huì)發(fā)出一定波長的熒光，從而可確定組織中某種抗原的定位，進(jìn)而還可進(jìn)行定量分析。
2.免疫酶標(biāo)法
免疫酶標(biāo)方法是繼免疫熒光后，于60年代發(fā)展起來的技術(shù)。先以酶標(biāo)記的抗體與組織或細(xì)胞作用，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性產(chǎn)物或具有一定電子密度的顆粒，通過光鏡或電鏡，對(duì)細(xì)胞表面和細(xì)胞內(nèi)的各種抗原成分進(jìn)行定位研究。免疫酶標(biāo)技術(shù)是目前最常用的技術(shù)。主要優(yōu)點(diǎn)是定位準(zhǔn)確，對(duì)比度好，染色標(biāo)本可長期保存，適用于光鏡、電鏡研究等。目前免疫酶標(biāo)法在病理診斷中廣為使用的有ABC法、SP三步法、即用型二步法檢測系統(tǒng)等。
3.免疫膠體金技術(shù)
是以膠體金這樣一種特殊的金屬顆粒作為標(biāo)記物。膠體金能迅速而穩(wěn)定地吸附蛋白，對(duì)蛋白的生物學(xué)活性沒有明顯影響。用膠體金標(biāo)記一抗、二抗或其他能特異性結(jié)合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌A蛋白)等作為探針，可對(duì)組織或細(xì)胞內(nèi)的抗原進(jìn)行定性、定位，甚至定量。特別適合于免疫電鏡的單標(biāo)記或多標(biāo)記定位。也適合進(jìn)行光鏡觀察。

適應(yīng)癥

組織或細(xì)胞中凡是能作為抗原或半抗原，如蛋白質(zhì)、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受體、酶、激素、核酸及病原體等都可用免疫組化法對(duì)相應(yīng)的特異性抗體進(jìn)行檢測。

參考資料

[1]

免疫組化檢查是什么？_39問醫(yī)生 · 39健康網(wǎng)[引用日期2021-07-07]

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