毛細(xì)管區(qū)帶電泳法
【毛細(xì)管電泳】是以彈性石英毛細(xì)管為分離通道，以高壓直流電場(chǎng)為驅(qū)動(dòng)力，依據(jù)樣品中各組分之間淌度和分配行為上的差異而實(shí)現(xiàn)分離的電泳分離分析方法。
毛細(xì)管電泳所用的石英毛細(xì)管柱，在pH值＞3的情況下，其內(nèi)表面帶負(fù)電，與緩沖液接觸時(shí)形成雙電層，在高壓電場(chǎng)作用下，形成雙電層一側(cè)的緩沖液由于帶正電而向負(fù)極方向移動(dòng)，從而形成電滲流。同時(shí)，在緩沖溶液中，帶電粒子在電場(chǎng)作用下，以各自不同速度向其所帶電荷極性相反方向移動(dòng)，形成電泳。帶電粒子在毛細(xì)管緩沖液中的遷移速度等于電泳和電滲流的矢量和。各種粒子由于所帶電荷多少、質(zhì)量、體積以及形狀不同等因素引起遷移速度不同而實(shí)現(xiàn)分離。 目前，毛細(xì)管電泳的分離模式有以下幾種。
(1)毛細(xì)管區(qū)帶電泳，用以分析帶電溶質(zhì)。為了降低電滲流和吸附現(xiàn)象，可將毛細(xì)管內(nèi)壁涂層。
(2)毛細(xì)管凝膠電泳，在毛細(xì)管中裝入單體，引發(fā)聚合形成凝膠，主要用于測(cè)定蛋白質(zhì)、DNA等大分子化合物。另有將聚合物溶液等具有篩分作用的物質(zhì)，如葡聚糖、聚環(huán)氧乙烷，裝人毛細(xì)管中進(jìn)行分析，稱毛細(xì)管無(wú)膠篩分電泳，故有時(shí)將此種模式總稱為毛細(xì)管篩分電泳，下分為凝膠和無(wú)膠篩分兩類。 (3)膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜，在緩沖液中加入離子型表面活性劑如十二烷基硫酸鈉，形成膠束，被分離物質(zhì)在水相和膠束相(準(zhǔn)固定相)之間發(fā)生分配并隨電滲流在毛細(xì)管內(nèi)遷移，達(dá)到分離。本模式能用于中性物質(zhì)的分離。 (4)親和毛細(xì)管電泳，在毛細(xì)管內(nèi)壁涂布或在凝膠中加入親和配基，以親和力的不同達(dá)到分離目的。
(5)毛細(xì)管電色譜，是將HPLC的固定相填充到毛細(xì)管中或在毛細(xì)管內(nèi)壁涂布固定相，以電滲流為流動(dòng)相驅(qū)動(dòng)力的色譜過(guò)程，此模式兼具電泳和液相色譜的分離機(jī)制。
(6)毛細(xì)管等電聚焦電泳，是通過(guò)內(nèi)壁涂層使電滲流減到最小，再將樣品和兩性電解質(zhì)混合進(jìn)樣，兩個(gè)電極槽中分別為酸和堿，加高電壓后，在毛細(xì)管內(nèi)建立了pH梯度，溶質(zhì)在毛細(xì)管中遷移至各自的等電點(diǎn)，形成明顯區(qū)帶，聚焦后用壓力或改變檢測(cè)器末端電極槽儲(chǔ)液的pH值使溶質(zhì)通過(guò)檢測(cè)器。
(7)毛細(xì)管等速電泳，采用先導(dǎo)電解質(zhì)和后繼電解質(zhì)，使溶質(zhì)按其電泳倘度不同得以分離。
以上各模式以(1)、(2)、(3)種應(yīng)用較多。
電極槽和毛細(xì)管內(nèi)的溶液為緩沖液，可以加入有機(jī)溶劑作為改性劑，以及加入表面活性劑，稱作運(yùn)行緩沖液。運(yùn)行緩沖液使用前應(yīng)脫氣。電泳譜中各成分的出峰時(shí)間稱遷移時(shí)間。膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜中的膠束相當(dāng)于液相色譜的固定相，但它在毛細(xì)管內(nèi)隨電滲流遷移，故容量因子為無(wú)窮大的成分最終也隨膠束流出。其他各種參數(shù)都與液相色譜所用的相同。 一、對(duì)儀器的一般要求
所用的儀器為毛細(xì)管電泳儀。正文中凡采用毛細(xì)管電泳法測(cè)定的品種，其所規(guī)定的測(cè)定參數(shù)，除分析模式、檢測(cè)方法(如紫外光吸收或熒光檢測(cè)器的波長(zhǎng)、電化學(xué)檢測(cè)器的印加電位等)應(yīng)按照該品種項(xiàng)下的規(guī)定外，其他參數(shù)如毛細(xì)管內(nèi)徑、長(zhǎng)度、緩沖液的pH值、濃度、改性劑添加量、運(yùn)行電壓或電流的大小、運(yùn)行的時(shí)間長(zhǎng)短、毛細(xì)管的溫度等，均可參考該品種項(xiàng)下規(guī)定的數(shù)據(jù)，根據(jù)所用儀器的條件和預(yù)試驗(yàn)的結(jié)果，進(jìn)行必要的調(diào)整。 二、系統(tǒng)適用性試驗(yàn)
同高效液相色譜法項(xiàng)下，按各品種項(xiàng)下的要求，進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)，并調(diào)節(jié)各運(yùn)行參數(shù)使達(dá)到規(guī)定指標(biāo)，方可正式測(cè)定。
三、測(cè)定法
同高效液相色譜法項(xiàng)下。目前毛細(xì)管電泳儀的進(jìn)樣精度較高效液相色譜法低，定量分析時(shí)以用內(nèi)標(biāo)法為宜。
