片段分析(Fragment analysis,FA)是一種分子生物學(xué)技術(shù),這里的片段特指以DNA或者cDNA為模板,由PCR過程所產(chǎn)生的,數(shù)目不等的核苷酸構(gòu)成的大小不等的DNA片段,對這些片段,利用其大小或者標(biāo)記熒光的差異,進(jìn)行分析的方法。被廣泛的應(yīng)用于醫(yī)學(xué)、環(huán)境、農(nóng)業(yè)研究等領(lǐng)域的基因型分型、DNA指紋分析、突變檢測等。

正文

技術(shù)原理

從生物樣本,如組織、血液、痰液中提取核酸(DNA、RNA),制備相應(yīng)的模板、引物,進(jìn)行多重PCR,然后采用凝膠電泳、PAGE電泳、HPLC、DHPLC、毛細(xì)管電泳等方法中的一種進(jìn)行DNA片段分析,最后將獲得的數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。

先進(jìn)片段分析(Advanced fragment analysis,AFA),是片段分析中較為領(lǐng)先的技術(shù)。原理是設(shè)計針對不同目標(biāo)靶點的引物,每個靶點擴(kuò)增得到的產(chǎn)物至少有1bp以上的差別。交第三方合成引物并在末端標(biāo)記熒光,不同大小片段采用不同顏色熒光標(biāo)記,進(jìn)行多重聚合酶鏈反應(yīng)(PCR),使得所有靶點的核酸片段都帶熒光標(biāo)記(圖A)。產(chǎn)物預(yù)處理后,進(jìn)行毛細(xì)管電泳,利用熒光檢測器對不同片段大小的產(chǎn)物進(jìn)行識別和區(qū)分(圖B)。使用軟件分析數(shù)據(jù)來決定以下結(jié)果:

1)大?。悍治鲕浖妹糠N樣品中的標(biāo)準(zhǔn)尺寸為每種樣品創(chuàng)建一條標(biāo)準(zhǔn)曲線,

然后通過熒光標(biāo)記片段與標(biāo)準(zhǔn)曲線的比較獲得片段的相對大小。

2)基因型:分析軟件根據(jù)用戶自定義的基因位點來分配等位基因。

FA操作過程

生物樣本
痰液
組織
血液
核酸提取
RNA
DNA
cDNA
模板
多重PCR
片段分析
毛細(xì)管電泳
PAGE電泳
DHPLC
HPLC
凝膠電泳
數(shù)據(jù)分析

FA發(fā)展歷史

a) 瓊脂糖凝膠電泳

瓊脂糖凝膠電泳是用瓊脂或瓊脂糖作支持介質(zhì)的一種電泳方法。它兼有“分子篩”和“電泳”的雙重作用。DNA分子在高于等電點的pH溶液中帶負(fù)電荷,在電場中向正極移動。由于糖-磷酸骨架在結(jié)構(gòu)上的重復(fù)性質(zhì),相同數(shù)量的雙鏈DNA幾乎具有等量的凈電荷,因此它們能以同樣的速率向正極方向移動。遷移速度與核酸分子本身的大小和構(gòu)型有關(guān),相同電場強(qiáng)度下,分子量較小的DNA分子遷移較快。

瓊脂糖凝膠分離DNA片段大小范圍較廣,不同濃度瓊脂糖凝膠可分離長度從200bp至近50kb的DNA片段。其分辨率雖比PAGE電泳低,但它制備容易。瓊脂糖通常用水平裝置在強(qiáng)度和方向恒定的電場下電泳。裝置如圖所示:

1.PAGE電泳

聚丙烯酰胺凝膠電泳(polyacrylamide gelelectrophoresis,簡稱PAGE),是以聚丙烯酰胺凝膠作為支持介質(zhì)的一種常用電泳技術(shù)。聚丙烯酰胺凝膠為三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),具有分子篩效應(yīng)。

聚丙烯酰胺分離小片段DNA(5-500bp)效果較好,其分辨力極高,甚至相差1bp的DNA片段就能分開。聚丙烯酰胺凝膠電泳很快,可容納相對大量的DNA,但制備和操作比瓊脂糖凝膠困難。聚丙烯酰胺凝膠采用垂直裝置進(jìn)行電泳。

1.HPLC|DHPLC

高效液相色譜法(High Performance Liquid Chromatography \ HPLC)以液體為流動相,采用高壓輸液系統(tǒng),將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱,在柱內(nèi)各成分被分離后,進(jìn)入檢測器進(jìn)行檢測,從而實現(xiàn)對試樣的分析。

變性高效液相色譜分析(denaturing high performance liquid chromatography \ DHPLC),在部分變性的條件下,通過雜合與純合二倍體在柱中保留時間的差異,發(fā)現(xiàn)DNA突變。異源雙鏈DNA與同源雙鏈DNA的解鏈特性不同,在部分變性條件下,異源雙鏈因有錯配區(qū)的存在而更易變性,在色譜柱中的保留時間短于同源雙鏈,故先被洗脫下來,在色譜圖中表現(xiàn)為雙峰或多峰的洗脫曲線。

DHPLC是一種基因突變篩查技術(shù),能夠自動化、高通量進(jìn)行,且除PCR之外,勿需進(jìn)行PCR引物修飾、購買特殊試劑、檢測標(biāo)記信號或作其它的樣品處理。DHPLC靈敏度和特異性較高、檢測DNA片段和長度變動范圍廣、相對價廉。檢測每個樣品只需要8分鐘左右,且能夠純化DNA片斷。只能檢測雜合突變是DHPLC的不足之處,但是可以通過純合突變樣品和野生型樣品混合的方法來解決。

1.毛細(xì)管電泳

毛細(xì)管電泳(capillary electrophoresis,CE)又稱高效毛細(xì)管電泳(high performance capillary electrophoresis,HPCE),是一類以毛細(xì)管為分離通道、以高壓直流電場為驅(qū)動力的新型液相分離技術(shù)。毛細(xì)管電泳實際上包含電泳、色譜及其交叉內(nèi)容,它使分析化學(xué)得以從微升水平進(jìn)入納升水平。

毛細(xì)管電泳通常使用內(nèi)徑為25-100μm的彈性(聚酰亞胺)涂層熔融石英管。具有:高效、快速、微量、儀器簡單、易自動化、操作方便、應(yīng)用范圍廣等優(yōu)點。

FA技術(shù)特點

傳統(tǒng)的基因片段分析建立在凝膠電泳基礎(chǔ)上,利用片段大小以及電荷不同對核酸產(chǎn)物進(jìn)行分離和分析,盡管應(yīng)用普遍、成本較低,但是卻存在以下缺點:操作繁瑣;分辨率低,無法精確度量基因片段的堿基數(shù);有EB污染,嚴(yán)重危害人類健康。

先進(jìn)FA檢測技術(shù)的核心內(nèi)容是多重PCR技術(shù)以及毛細(xì)電泳系統(tǒng)分離。在同一個PCR反應(yīng)體系中包含多對引物,各引物特異性地結(jié)合相應(yīng)的目的基因,進(jìn)行多重PCR;通過毛細(xì)管電泳系統(tǒng)可對不同片段長度的PCR產(chǎn)物進(jìn)行分離和識別,同時,根據(jù)峰面積的大小還可對不同產(chǎn)物進(jìn)行定量分析。先進(jìn)FA包含以下幾種先進(jìn)的技術(shù):

1.高特異性等位基因多重分析(Multiplexing Allele Specific Assay, MASA):能在一個反應(yīng)中同時分析多達(dá)15個SNP位點,可用于藥物基因組學(xué)分析;

2.高靈敏度高特異性病原體分析(High Sensitivity Pathogen Specific, HSPS):在一個反應(yīng)體系里面同事檢測與識別多個低拷貝數(shù)的病原體,用于感染性病原體的多重檢測。

傳統(tǒng)PCR僅應(yīng)用一對引物,通過PCR擴(kuò)增產(chǎn)生一個核酸片段,主要用于單一致病因子等的鑒定。

多重PCR特點:①高效性,在同一PCR反應(yīng)管內(nèi)同時檢出多種病原微生物,或?qū)τ卸鄠€型別的目的基因進(jìn)行分型,特別是用一滴血就可檢測多種病原體.②系統(tǒng)性,多重PCR很適宜于成組病原體的檢測,如肝炎病毒,腸道致病性細(xì)菌,性病,無芽胞厭氧菌,戰(zhàn)傷感染細(xì)菌及細(xì)菌戰(zhàn)劑的同時偵檢.③經(jīng)濟(jì)簡便性,多種病原體在同一反應(yīng)管內(nèi)同時檢出,將大大的節(jié)省時間,節(jié)省試劑,節(jié)約經(jīng)費開支,為臨床提供更多更準(zhǔn)確的診斷信息。

毛細(xì)管電泳特點:容積小(一根100 cm×75 μm 管子的容積僅4.4 μL);側(cè)面/截面積比大,因而散熱快、可承受高電場(100-1000 V/cm);可使用自由溶液、凝膠等為支持介質(zhì);在溶液介質(zhì)下能產(chǎn)生平面形狀的電滲流。

由此,可使毛細(xì)管電泳具備如下優(yōu)點:

(1)高效:塔板數(shù)目在10-10 片/m 間,當(dāng)采用CGE 時,毛細(xì)管電泳色譜圖,塔板數(shù)目可達(dá)10 片/m 以上;遠(yuǎn)高于高效液相色譜;

(2)快速:一般在十分鐘內(nèi)完成分離,快的僅需三分鐘;

(3)微量:進(jìn)樣所需的樣品體積為nL 級;

(4)儀器簡單、易自動化;

(5)操作方便;

(6)應(yīng)用范圍廣。

與直接測序相比:某一個基因位點是比較容易得知的,但要獲得一段完整的基因序列就很困難,若是得不到就無法進(jìn)行直接序列比較。而如果標(biāo)記離基因位點很近,那么可以通過標(biāo)記分析推斷出突變基因的存在。標(biāo)記分析要比直接基因測序快很多。

FA相關(guān)應(yīng)用介紹

a) 臨床方面

i. 病原微生物

片段分析能夠準(zhǔn)確、快速地檢測出致病的病原微生物。

按照疾病傳播途徑的不同,大致可以分為:蟲媒、呼吸道、寄生蟲、接觸、胃腸道、血液等。片段分析在這幾類疾病的病原微生物診斷應(yīng)用中的成效顯著。例如,Jian Li, Yanhui Zhang等人研究了瘧原蟲的簡單重復(fù)序列(SSRs),區(qū)分了近600種用多態(tài)微衛(wèi)星標(biāo)記的約氏瘧原蟲基因組。

除了對傳播瘧疾的瘧原蟲的研究,片段分析還被廣泛地用于呼吸道疾病的研究,如麻疹病毒、致肺結(jié)核的分支桿菌、水痘病毒、H1N1流感以及雞瘟病毒等。Maria A. Nagel, Don Gilden等人運用逆轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)和基因圖譜分析系統(tǒng)(GeXPS)以及毛細(xì)管電泳和熒光分析技術(shù),克服了宏陣列和微陣列分析不能檢測潛伏在人神經(jīng)中樞的水痘帶狀皰疹病毒(VZV)基因的缺點,該技術(shù)能夠快速分析VZV在人神經(jīng)系統(tǒng)潛伏期時的所有基因轉(zhuǎn)錄。除了上述幾位研究人員,Meng Qin, Da-yan Wang等人也運用了GeXP基因分析系統(tǒng)研究了H1N1流感病毒,研究發(fā)現(xiàn)該方法具有較高的靈敏度和特異性,并且該法可以用來檢測潛伏的混合感染,為流行性感冒的監(jiān)管提供了強(qiáng)有力的方法,同時也提供了一個研究相似病原體變異的平臺。而Jin Li, Nai-Ying Mao等人運用多重逆轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)和GeXP系統(tǒng),對16種人呼吸道病毒進(jìn)行了同時檢測,結(jié)果顯示這是一種快速的、高成本效益的、靈敏的、具有特異性且高通量的檢測呼吸道病毒感染的方法。

片段分析在寄生蟲方面也有研究應(yīng)用。如利什曼蟲, Rolando Oddone,Carola Schweynoch等人運用多位點微衛(wèi)星分型分析技術(shù)(MLMT)根據(jù)15個獨立位點來識別利什曼蟲,結(jié)果證明MLMT適用于利什曼蟲亞屬的流行病學(xué)和菌株群體遺傳學(xué)的研究。

通過接觸傳播的如腺病毒、人乳頭瘤病毒(HPV)等。低危性HPV引發(fā)扁平疣、尋常疣等疣,高危性HPV引發(fā)陰莖癌、宮頸癌、直腸癌等癌癥。Meng-Jie Yang, Le Luo等人采用多重PCR和GeXP分析儀對11種人乳頭瘤病毒(其中包括9中高危型和2種低危型)進(jìn)行檢測,結(jié)果表明GeXP-PCR是一種快速、高靈敏度、高通量的檢測多種HPV感染的方法。國內(nèi)也有人運用GeXP-PCR對HPV進(jìn)行檢測,如蘆春斌,楊夢婕等人利用該技術(shù)對5種不同亞型的HPV病毒進(jìn)行檢測鑒別。

胃腸道傳播疾病方面研究如與手足口病的腸道病毒相關(guān)的檢測。目前已有的檢測方法有實時逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)、內(nèi)嵌套式PCR、限制性片段長度多態(tài)性-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR-RFLP),這些方法都能夠鑒別不同血清的腸道病毒,然而實時RT-PCR和內(nèi)嵌套式PCR只能檢測有限數(shù)量的血清,PCR-RFLP盡管能夠同時檢測多個血清樣本,可是價格卻比較貴,也很耗時耗人力,因此Xiumei Hu, Yong Zhang等人研究認(rèn)為GeXP分析法是一種快速、低成本、高通量區(qū)分9種手足口病腸道病毒血清型的方法。

通過血液傳播的疾病如艾滋病、乙肝、丙肝等。它們均是由病毒引起的疾病,通過片段分析來檢測艾滋病病毒(人體免疫缺陷病毒HIV)、乙肝病毒(HBV)、丙肝病毒(HCV)等病毒的研究也有不少。肖信研究建立了用于廣西HIV-1流行毒株的實時熒光定量PCR方法,并對方法科學(xué)性進(jìn)行評價,結(jié)果表明熒光定量PCR方法具有線性范圍廣,特異度高,重復(fù)性好,檢測下限低,檢測試劑穩(wěn)定性好,并與國際標(biāo)準(zhǔn)的NASBA法檢測結(jié)果高度相關(guān),與國內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)的試劑盒產(chǎn)品具有較好的一致性,能適應(yīng)廣西地區(qū)不同HIV-1亞型;該方法實用、可行,在病毒載量檢測、早期感染檢測、治療病人的耐藥監(jiān)測等方面具有良好的應(yīng)用前景。尹菊囡采用多重巢式PCR技術(shù)研究構(gòu)建一種快速、經(jīng)濟(jì)、實用、可靠的同步檢測HBV、HCV和HIV-1的方法,結(jié)果表明該方法可同時檢測HBV、HCV和HIV-1,但其靈敏度和特異度需進(jìn)一步鑒定。李桂明采用磁珠提取核酸技術(shù)建立了一種能同時檢測、鑒定和定量三種病毒的多重實時定量RT PCR檢測方法,將這種方法的靈敏度與Qiagen公司的病毒DNA和RNA提取試劑盒進(jìn)行比較,結(jié)果表明它們有很好的相關(guān)性;且一種病毒核酸的擴(kuò)增不會對其它兩種產(chǎn)生影響;該檢測體系具有很高的靈敏度,最低可達(dá)50拷貝/ml;與單重的檢測相比也顯示出很好的相關(guān)性;表明這種檢測體系有大規(guī)模用于獻(xiàn)血篩查的潛力。

ii. 個體化用藥

個體化藥物用藥是根據(jù)病人的年齡、身高體重、遺傳特征等因素,選擇適合病人的藥物種類和劑量,來顯著提高藥物療效并減少藥物毒性的一種用藥方案。

統(tǒng)計數(shù)據(jù)表明,絕大多數(shù)藥物在約1/3的使用者中不能取得滿意療效,約1/6的使用者發(fā)生不同程度的不良反應(yīng),總的安全有效率僅約50%。目前藥物不良反應(yīng)是人類第五大死亡原因。為在基因組學(xué)的基礎(chǔ)上,通過將基因表達(dá)或單核苷酸的多態(tài)性與藥物的療效或毒性聯(lián)系起來,研究藥物如何由于遺傳變異而產(chǎn)生不同的作用,被稱為藥物基因組學(xué)。迄今已有100余種藥物經(jīng)美國FDA批準(zhǔn)貼上了遺傳標(biāo)簽,用于提示不同基因型的患者在應(yīng)用該藥物時可能產(chǎn)生的療效和毒性。因此,通過基因檢測可針對性地為每位患者“量身定做”一套最適合的治療方案,從而最大程度地提高治療的有效率,減少藥物的毒副作用,避免用藥不當(dāng)貽誤時機(jī)。

片段分析技術(shù)被廣泛應(yīng)用于腫瘤領(lǐng)域,包括乳腺癌、卵巢癌、結(jié)直腸癌、肺癌等。有卵巢癌病史的家族中常伴隨著BRCA1以及BRCA2基因突變,Herman等人通過多重連接探針擴(kuò)增技術(shù)(MLPA )分析BRCA1基因,對產(chǎn)物大小進(jìn)行分析,意外的發(fā)現(xiàn)了在該基因的外顯子11有一段374bp的序列缺失,然而用傳統(tǒng)的測序法并未發(fā)現(xiàn)該現(xiàn)象。Pham等人通過小發(fā)夾狀RNA干擾乳腺癌干細(xì)胞的CD44,利用多重PCR結(jié)合片段分析法,經(jīng)GeXP遺傳分析儀對干細(xì)胞相關(guān)基因的基因表達(dá)水平進(jìn)行了研究,發(fā)現(xiàn)通過干擾CD44,會使得乳腺癌干細(xì)胞向非乳腺癌干細(xì)胞分化,基因表達(dá)水平也更相似,這為乳腺癌的治療提供了一種新的潛在的治療方法。Sadava等人研究靈芝對小細(xì)胞肺癌的療效,利用GeXP基因表達(dá)分析系統(tǒng)對與細(xì)胞循環(huán)及細(xì)胞凋亡相關(guān)的36個基因進(jìn)行了分析,發(fā)現(xiàn)其中經(jīng)靈芝處理后的9個基因的表達(dá)水平與經(jīng)化療藥物依托泊苷以及阿霉素治療后的不同。Dahan等人通過限制性片段長度多態(tài)性聚合酶鏈反應(yīng)(PCR-RFLP)技術(shù)以及CEQ的分型研究了與用于治療結(jié)腸直腸癌的西妥昔單抗藥效相關(guān)的潛在基因EGFR、EGF、CCND1、FCGR2A和FCGR3A的多態(tài)性,研究發(fā)現(xiàn)FCGR3A F158V以及CCND1 A870G的多態(tài)性對預(yù)測藥效、總生存數(shù)具有獨立重大的意義。Drew等人利用GeXP多重基因表達(dá)分析系統(tǒng)、微陣列芯片法及實時熒光定量法對結(jié)腸普通組織、息肉及腫瘤組織的炎癥相關(guān)基因的表達(dá)水平進(jìn)行了研究,結(jié)果表明GeXP表達(dá)譜分析法可實現(xiàn)同時對多個基因表達(dá)進(jìn)行定量,相比實時熒光定量PCR方法,它更快速、價格更低,同時多個內(nèi)參基因能確?;虮磉_(dá)水平的準(zhǔn)確性。

在心血管疾病方面,也有用到片段分析方法進(jìn)行相關(guān)研究。腎胺酶抗體具有血流動力學(xué)效應(yīng),它很可能參與調(diào)節(jié)心血管功能,Buraczynska等人通過PCR-RFLP方法對腎胺酶抗體基因上的3個SNP位點進(jìn)行基因分型發(fā)現(xiàn)該基因的多態(tài)性與糖尿病第二類患者的高血壓相關(guān),并發(fā)現(xiàn)rs10887800的等位基因G很可能會增加糖尿病患者中風(fēng)的風(fēng)險。LDLR基因的突變是家族性高膽固醇血癥最常見的病因,而大片段基因重組在LDLR基因突變中所占比例高達(dá)10%,Goldmann等人利用MLPA方法首次發(fā)現(xiàn)非同源末端連接(non-homologous end joining, NHEJ)參與LDLR的基因重組。Botto等人利用測序并結(jié)合PCR-RFLP方法,研究LMNA基因的突變,該基因突變與擴(kuò)張型心肌病密切相關(guān),研究發(fā)現(xiàn)了在最常見的R190W突變旁邊有一類新的錯義突變R189W。張陽東等人還通過GeXP平臺對冠心病相關(guān)基因表達(dá)分析中的管家基因的表達(dá)水平進(jìn)行了比較,并提出β-actin和SRP14可作為檢測CAD相關(guān)基因表達(dá)水平的內(nèi)參基因。寧波海爾施基因科技有限公司也非常關(guān)注心血管疾病相關(guān)研究,在AFA技術(shù)上開發(fā)了多項專利,如“一種指導(dǎo)華法林用藥的多重基因檢測試劑盒及其檢測方法”已被授權(quán),通過對藥物靶標(biāo)及參與藥物代謝等基因的遺傳多態(tài)性的診斷,用于華法林抗凝的安全性指導(dǎo);同時,還開發(fā)了針對β-受體阻斷藥用藥、噻嗪類利尿藥降壓藥以及血管擴(kuò)張藥硝酸甘油的多重基因檢測試劑盒,目前正在審核過程中。

片段分析方法還被用于其它疾病的研究,如淋巴細(xì)胞性白血病、肌萎縮、抑郁癥等。

iii. HLA分型

在組織或器官移植中供者與受者之間相容(不排斥)還是不相容(排斥)都是由它們組織特異性所決定的。這種代表個體特異性的組織抗原稱組織相容性抗原,一套這樣的抗原系統(tǒng)稱主要組織相容性系統(tǒng)(major histocompatibility system,MHS)。編碼MHS的基因群稱為主要組織相容性復(fù)合體MHC。人的MHC就稱HLA(human leukocyte antigen),是迄今已知基因中等位基因多態(tài)性最高的基因復(fù)合體。 HLA包括有I類II類和III類基因部分。實踐證明,HLA相同的同胞供者的腎移植,90%以上效果良好;單體型不同的供者,效果明顯下降;兩單型皆不同者則很少存活。

以往,用于HLA分型的方法主要是血清學(xué)和細(xì)胞學(xué)方法,由于其方法學(xué)上的缺點,分型的準(zhǔn)確性較差,且不能進(jìn)行亞型分析。最近幾年,隨著分子生物學(xué)的不斷進(jìn)步,特別是PCR技術(shù)的廣泛應(yīng)用,HLA基因分型技術(shù)得到了迅速的發(fā)展,各具特點的不同HLA基因分型技術(shù)不斷出現(xiàn),在方法學(xué)上達(dá)到了穩(wěn)定、準(zhǔn)確、精細(xì)、簡便、實用的程度,為其臨床推廣應(yīng)用奠定了技術(shù)基礎(chǔ)。鄔于川等人應(yīng)用PCR-RFLP(限制性片段長度多態(tài)性)方法進(jìn)行了HLA-DP B1 等位基因與四川漢族人哮喘的相關(guān)性研究。黃飛等人進(jìn)行PCR-SSP(序列特異性引物)/PCR-SBT-HLA(直接測序分型) 高分辨等位基因分型比較,發(fā)現(xiàn)兩種方法具有實驗互補(bǔ)意義。若同時應(yīng)用兩種方法能夠有效改善HLA 等位基因高分辨分型的準(zhǔn)確性和重復(fù)一致率。

值得注意的是,目前臨床用血多為成分輸血,成分血分離自全血,不可避免會殘留少量白細(xì)胞或血小板。而有核細(xì)胞或血小板表面存在的HLA會隨著輸血進(jìn)入患者體內(nèi),異體HLA抗原可對患者的HLA分型判定產(chǎn)生干擾?,F(xiàn)報道1例接受過多次大量成分血輸注治療的重型再生障礙性貧血患者,由于未嚴(yán)格按HLA分型血標(biāo)本規(guī)定時間間隔進(jìn)行血標(biāo)本采集,導(dǎo)致HLA低分辨基因分型結(jié)果無法判定。

1.親權(quán)鑒定

古代滴血認(rèn)親的方法,造成了不少冤案。如今,有了片段分析法,就可以快速、準(zhǔn)確的鑒定親權(quán)關(guān)系。

楊玉發(fā)等人,采用PCR復(fù)合擴(kuò)增技術(shù)、毛細(xì)管電泳及五色熒光自動化檢測技術(shù)對143例親權(quán)鑒定案例389份血液樣本,進(jìn)行了15個STR基因位點和1個Amelogenin性別基因位點檢測分析,得出結(jié)論:STR基因檢測位點多,多態(tài)性高,DNA片段短、造成錯配和優(yōu)先擴(kuò)增的可能性小,提高了PCR擴(kuò)增的成功率和靈敏度,而且標(biāo)本用量少(一般僅為0.1ng模板DNA),因此,STR基因位點檢測技術(shù)可以作為親權(quán)鑒定的主要技術(shù)手段。潘猛等人,取2011~2012年來自江蘇省的262份無血緣關(guān)系的漢族個體,對24個STR位點進(jìn)行復(fù)合擴(kuò)增,ABI3130自動基因分析儀進(jìn)行片段分析并進(jìn)行基因分型,分析了24個Y染色體短串聯(lián)重復(fù)序列(STR)基因座在江蘇漢族群體的基因多態(tài)性、基因頻率和其他地域人群之間的遺傳距離。

1.其他方面

產(chǎn)前診斷、個體識別等